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发布时间:2008--1-2- |
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本发明是一种分子生物学技术,即一种改进了PCR反应参数和目标产物电泳条带检测程序的定量聚合酶链反应方法。其特点是聚合酶链反应的正、反引物的最终浓度为1-100uM。反应中正、反引物的解链温度为85-92℃,PCR反应的引物长度可为25-50硷基。PCR反应包括高温模板变性、引物与模板退火延伸两步。退火延伸温度为72-82℃。并可以将染色剂SYBR金与PCR样品混合后一起进行电泳,然后定量测定电泳凝胶上PCR产物条带的强度,SYBR金在加样缓冲液中的重量百分比浓度为万分之一至百分之一。本发明PCR反应更为稳定,使PCR平坡出现推迟,目标产物直线累积期增长。从而使经典PCR能在完全保持其简单、快速和专一的优点的同时,实现了定量功能的突破。将SYBR金与样品混合一起进行电泳的作法,则不仅提高了定量染色灵敏度,扩展了定量测定的线性范围,而且省略了染色步骤,减少了染色剂用量。 |
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