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一种基因定点突变方法和以此方法获得的抗草甘膦基因及其表达载体和转化子 |
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发布时间：2007--0-7- |
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| 本发明涉及一种基因定点突变方法和通过该方法获得的重组aroA基因、以及含有此基因的载体和转化子。本方法选用“需突变的位点与一单酶切位点相距10-20个碱基”的DNA序列作源模板，按源模板的序列特点设计出相对应的一个5’-端引物和两个3’-端引物，并采用两步PCR扩增反应，得到引入点突变的基因片段。运用该方法，可以人为加大发生基因突变的准确性。本发明还应用该定点突变法，把通过基因优化法获得的基因aroA-M1作进一步改良，获得活性更高而草甘膦敏感度更低的EPSP合成酶基因aroA-M142；aroAM142编码的酶具有比野生型低得多的K[PEP]，而K[Glyphosate]却明显增加，既提高了酶的催化效率，又减低了酶与草甘膦的亲和力，使酶抵御草甘膦的能力大幅度提高；酶的性质也得到了进一步的改良。 |
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