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- 该缓冲液主要是提供合适酸碱度的连接体系,如10mMMgCl2作用是激活酶反应；1-20mM的DTT(最常用的是10mM),作用是维持还原性环境,稳定酶活性,25-50μg/mL的BSA,作用是增加蛋白质的浓度,防止因蛋白浓度过稀而造成酶的失活,与限制酶缓冲液不同的是连接酶缓冲液中还有0.5-4mMATP(三磷酸腺苷),现多用浓度是1mM,是酶反应所必须的。 连接缓冲液的pH也很重要,一般将缓冲液的pH调到7.4-7.8,较多用7.8,实验表明如把pH定为7.5-8.0,酶活力定为100%,则体系偏碱性时(如pH8.3),仅为全部酶活力的65%,当体系偏酸时(pH6.9),仅为全部酶活力的40%。 ATP浓度对连接酶反应影响很大,而且ATP极易分解,所以含有ATP的连接酶长时间放置后往往失效,所以一般先配成不含ATP的缓冲液(可长期保存),临用时再加入新配置的ATP母液。
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